고분자 전해질 다층박막과 마이크로 컨택트 프린팅을이용한 단백질 고정화방법

출원번호 : 10-2008-0054372 (출원일: 2008-06-10)

등록번호 : 10-1046337 (등록일: 2011-06-28)

특허권자 : 충남대학교산학협력단

요약 : 본 발명은 선택적 단백질 고정화방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 고분자 전해질을 이용한 다층박막 증착(Layer-by-layer deposition, LBL)의 표면 처리를 통하여 얻어진 표면 위에 정전기적 인력에 의한 선택적 단백질 고정화방법 및 상기 방법으로 항원 단백질을 고정화함으로써 항원-항체 반응을 유도할 수 있는 단백질 패터닝을 수행하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 단백질 고정화 방법은 단백질 활성 유지에 적합한 단백질의 3차원 입체구조가 유지되기에 유리한 조건이 되어 단백질 칩 내에서 탐침으로서의 효율을 높이고, 확산에 의한 단백질의 고정화가 아니므로 고분자 박막의 두께가 증가하여도 단백질 패턴의 크기가 동일하게 유지되고, 그 결과 동일 조건에서 형광세기가 항상 일정하므로 신호 세기에 대한 오차범위가 좁아져 보다 정확한 진단을 가능하게 한다. 따라서, 본 발명은 진단을 위한 단백질 칩의 제작에 사용될 수 있을 뿐만 아니라 미생물 칩, 세포 칩, 조직(tissue)칩을 제작하기 위한 미생물이나 세포의 고정화를 유도하는 단백질의 고정화시에 응용될 수 있다.

대표청구항 : 단백질을 고정화시키는 방법에 있어서,ⅰ) H2SO4 및 H2O2를 포함하는 피라나 용액, 증류수, 에탄올(ethanol) 및 아세톤(acetone)으로 유리 기판을 세척하고, 폴리(아릴아민 하이드로클로라이드)(poly(allyamine hydrochloride), PAH)와 폴리(4-암모늄 스티렌 설폰산)(poly(4-ammonium styrene sulfonic acid, PSS) 중에서 하나 이상을 포함하는 고분자 전해질을 이용하여 다층박막의 기판을 제작하는 단계;ⅱ) 폴리디메틸실록산(polydimethylsiloxane, PDMS) 전중합체(prepolymer)와 경화제를 섞은 후에, 이것을 실리콘 마스터 위에 올리고 나서, 열적 경화 후에 상기 실리콘 마스터로부터 경화된 PDMS를 분리해 미세패턴을 가지는 PDMS 마이크로 스탬프를 제작한 후, 산소 플라즈마 처리를 통하여 친수성기가 도입된 PDMS 마이크로 스탬프를 단백질 용액 내에 담지한 후 꺼내어서 질소를 이용하여 과잉의 단백질을 제거한 뒤, 단백질의 전사가 잘 이루어질 수 있도록 하기 위해서 마이크로 컨택트 프린팅 하기 전에 저온의 냉동고에서 일정시간 유지시키는 단계; 및ⅲ) 상기 ⅰ) 단계의 기판에 상기 ⅱ) 단계의 마이크로 스탬프를 이용하여 마이크로 컨택트 프린팅 방법에 의하여 단백질을 고정화시키고, 유리기판에 정전기적 인력 외에 물리적으로 흡착된 과잉의 단백질을 제거하기 위해 스탬핑이 이루어진 유리 기판을 세척하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 고정화방법.

상세링크 : http://newsd.wips.co.kr/wipslink/api/dkrdshtm.wips?skey=3511272000169