고속 대용량 자동화 당사슬 시료 전처리 시스템
출원번호 : 10-2015-0120176 (출원일: 2015-08-26)
등록번호 : 10-1711953 (등록일: 2017-02-24)
특허권자 : 충남대학교산학협력단
요약 : 본 발명은 혈청을 포함한 체액 및 조직에서 유래된 당단백질 시료 또는 당단백질, 항체 의약품에서 당사슬 추출시 시료가 대용량일 경우 높은 재현성을 보장하면서 기존의 방법보다 고속으로 당사슬을 추출하는 자동화 시스템에 관한 것이다.
대표청구항 : 혈청 시료를 준비하는 단계; 혈청 시료 내의 단백질 변성 단계; 단백질 변성 처리한 시료에 PNGase F 효소를 처리하여 단백질로부터 N-당사슬을 절단하는 단계; 에탄올을 가하여 단백질을 침전시키고 상층액의 N-당사슬을 분리하는 단계; 및 분리한 N-당사슬을 농축 및 정제하는 단계;를 포함하는 N-당사슬 시료 전처리 방법에 있어서,상기 혈청 시료 준비 단계는 20개 이상의 시료를 단일 배치(batch) 상에 나열하며, 각 시료는 15~30㎕를 취하며,상기 단백질 변성 단계는 시료가 든 용기를 70~90℃의 액체와 상온의 액체에 10~20초씩 번갈아 넣어 1분 30초~5분 동안 수행하거나, 시료가 든 용기를 가열 랙에 넣고 70~90℃ 내에서 1분~2분 동안 처리하고 상온으로 식히며,상기 PNGase F 효소처리 단계는 상기 단백질 변성 처리한 시료에 효소를 가한 후 마이크로웨이브 반응기에서 30~38℃ 온도로 5~20분 동안 수행하며,상기 분리한 N-당사슬 농축 및 정제단계는 액체시료 취급 자동화 시스템을 이용하여 흑연화 탄소 카트리지를 이용한 고체상 추출법으로 수행하되 세척, 시료 로딩, 탈염, 용출과정은 150~400mbar의 압력을 가하여 30초~70초간 수행하고, 시료는 15~25㎕를 로딩하며, 용출량은 1~2ml로 하며,상기 분리한 N-당사슬 농축 및 정제단계의 용출과정은 20% 및 40% 아세토나이트릴의 2개 분획을 이용하되, 아세토나이트릴 1ml씩을 옮기고, 200mbar의 압력으로 70초간 내리며, 0.05% 트리플루오로초산 포함 40% 아세토나이트릴을 1ml씩 옮기고 200mbar의 압력으로 65초간 내리며,상기 분리한 N-당사슬 농축 및 정제단계의 세척과정은 초순수를 300mbar의 압력으로 40초간 내리고, 0.1 트리플루오로초산 포함 80% 아세토나이트릴로 300mbar의 압력으로 35초간 내리고, 초순수를 300mbar 압력으로 40초간 내려 수행하며,상기 분리한 N-당사슬 농축 및 정제단계의 시료 로딩과정은 시료를 주입하고 200mbar의 압력으로 30초간 내리고, 탈염과정은 초순수를 250mbar 압력으로 1분간 내려 수행함을 특징으로 하는 고속 대용량 자동화 N-당사슬 시료 전처리 방법.
상세링크 : http://newsd.wips.co.kr/wipslink/api/dkrdshtm.wips?skey=3517102000823
