선택적이고 비파괴적인 Ｏ-당쇄 분리방법

선택적이고 비파괴적인 Ｏ-당쇄 분리방법

출원번호 : 10-2014-0076237 (출원일: 2014-06-23)

등록번호 : 10-1479622 (등록일: 2014-12-30)

특허권자 : 충남대학교산학협력단

요약 : 본 발명은 비드 고정화 (Bead Immobiliization) 방법을 이용하여 N-당쇄와 O-당쇄가 동시에 존재하는 당단백질에서 O-당쇄만을 선택적으로 추출 및 분리할 수 있는 방법에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로는 N-당쇄와 O-당쇄가 모두 존재하는 당단백질을 비드에 고정시키고 N-당쇄만 선택적으로 분리할 수 있는 특이적 효소인 PNGase F를 이용하여 N-당쇄를 제거한 후 β-제거 (β-elimination)를 통해 O-당쇄만을 선택적으로 분리하는 것이다. 본 발명의 비파괴적인 O-당쇄 분리방법은 다양한 당단백질에서 O-당쇄 분석에 효과적으로 이용될 수 있다.

대표청구항 : a) 비드를 활성화하는 단계;b) 활성화된 비드에 변성된 당단백질을 혼합하고 결합반응시키는 단계;c) 당단백질과 반응하지 않은 비드의 활성부위를 블로킹하는 단계;d) N-당쇄 특이적 효소를 처리하여 N-당쇄를 비드와 결합된 당단백질로부터 분리하는 단계;e) 분리된 N-당쇄가 포함된 상층액을 분리하는 단계;f) 비드를 포함하는 침전을 세척하는 단계;g) 침전에 비특이적 단백질 분해효소를 처리하여 비드로부터 O-당펩타이드를 분리하는 단계; 및h) 비드에서 분리된 O-당펩타이드에서 β-제거 방법으로 O-당쇄를 분리하는 단계;를 포함하는 O-당쇄를 선택적이고 비파괴적으로 분리하는 방법.

상세링크 : http://newsd.wips.co.kr/wipslink/api/dkrdshtm.wips?skey=3515022001116