무세포 단백질 합성을 이용하는 단백질 발현 또는 활성 증진 보조인자의 스크리닝 방법

무세포 단백질 합성을 이용하는 단백질 발현 또는 활성 증진 보조인자의 스크리닝 방법

출원번호 : 10-2019-0087540 (출원일: 2019-07-19)

등록번호 : 10-2284067 (등록일: 2021-07-26)

특허권자 : 충남대학교산학협력단

요약 : 본 발명은 무세포 단백질 합성을 이용하는 단백질 발현 또는 활성 증진 보조인자의 스크리닝 방법에 관한 것으로, 상세하게는 재조합 단백질의 생산에서 단백질의 발현 및 기능적 3차원 구조의 형성은 다양한 인자에 의해 영향을 받으므로, 특정 단백질의 합성 및 기능적 구조 형성에 도움을 주는 보조인자 단백질과 목적 단백질을 순차적으로 발현함으로써 활성을 가지는 목적 단백질의 생산성을 크게 향상시키는 스크리닝 방법에 관한 것이다.

대표청구항 : (1) 목적 단백질의 발현 또는 활성에 유용할 것으로 예측되는 후보 단백질을 각각 무세포 단백질 합성하는 단계;(2) 상기 단계 (1)에서 합성된 각각의 후보 단백질을 포함하는 반응물을 각각 정용여과(diafiltration)하여 무세포 단백질 합성에 의해 생성된 부산물을 제거한 후, 무세포 단백질 합성에 필요한 반응물을 첨가하여 보충하는 단계;(3) 상기 단계 (2) 이후에, 목적 단백질을 코딩하는 유전자 주형을 첨가하고, 목적 단백질의 무세포 단백질 합성을 수행하는 단계; 및(4) 상기 단계 (3)에서 합성한 목적 단백질의 발현 또는 활성 분석을 통해 목적 단백질의 발현 또는 활성 증진에 적합한 단백질을 선별하는 단계;를 포함하는 목적 단백질의 발현 또는 활성 증진용 후보 단백질을 스크리닝하는 방법으로서,상기 단계 (1)의 후보 단백질의 무세포 단백질 합성에 사용되는 유전자 주형은 2단계 오버랩 연장 PCR(two-step overlap extension PCR)을 이용하여 제조된 터미네이터를 포함하지 않는 선형의 유전자이거나 절단-라이게이션(digestion-ligation) 방법으로 제조된 선형의 유전자이며,상기 후보 단백질은 전사인자, 번역인자, 아실화티알엔에이합성효소(aminoacyl tRNA synthetase), ATP 재생인자, mRNA 안정화 인자, 샤페론(chaperone) 및 폴다아제(foldase) 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 발현 또는 활성 증진용 후보 단백질을 스크리닝하는 방법.

상세링크 : http://newsd.wips.co.kr/wipslink/api/dkrdshtm.wips?skey=3521322000662