세포질 침투성이 증진된 항체의 스크리닝 방법

세포질 침투성이 증진된 항체의 스크리닝 방법

출원번호 : 10-2019-0005297 (출원일: 2019-01-15)

등록번호 : 10-2154177 (등록일: 2020-09-03)

특허권자 : 충남대학교산학협력단

요약 : 본 발명은 세포질 침투성이 증진된 항체의 스크리닝 방법에 관한 것으로, 상세하게는 항체의 신속한 합성 및 특성 분석을 가능하게 하는 무세포 단백질 합성 시스템을 사용하여 세포질 투과성이 증진된 변이형 항체를 스크리닝하는 방법으로, 세포독성이 없으며, 무세포 단백질 합성 후 정제과정 없이 그대로 세포질 투과성을 평가할 수 있는 스크리닝 방법이다. 본 발명의 스크리닝 방법은 투과성이 증진된 항체를 선별하고, 선별된 항체가 표적에 대한 친화성이 야생형 수준으로 유지되는지를 확인하는 것이다.

대표청구항 : (1) 무세포 단백질 합성법으로 야생형 세포질 침투성 타겟 항체를 합성하는 단계; (2) 상기 단계(1)에서 합성된 타겟 항체를 포함하는 무세포 단백질 합성 반응액을 그대로 정제 없이 희석하여, 세포독성 및 세포질 침투성 확인 가능 농도를 결정하는 단계;(3) 상기 단계 (1)의 타겟 항체의 경쇄 가변영역의 서열이 변이된, 변이형 세포질 침투성 항체를 생산할 수 있는 유전자 서열을 PCR 증폭시키는 단계;(4) 상기 단계 (3)에서 획득한 PCR 증폭 산물을 합성 주형으로 하여, 무세포 단백질 합성으로 변이형 세포질 침투성 항체를 생산하는 단계;(5) 상기 단계 (4)에서 생산된 변이형 세포질 침투성 항체를 포함하는 무세포 단백질 합성 반응액을 상기 단계 (2)에서 결정한 농도로, 리포터 세포에 처리하고, 세포의 침투성이 증진된 변이형 세포질 침투성 항체를 선별하는 단계; 및(6) 상기 단계 (5)에서 선별된 세포의 침투성이 증진된 변이형 세포질 침투성 항체의 타겟 항원에 대한 친화성을 확인하는 단계;를 포함하는 침투성이 증진된 세포질 침투성 항체의 스크리닝 방법.

상세링크 : http://newsd.wips.co.kr/wipslink/api/dkrdshtm.wips?skey=3520374000618