N-당사슬 이성질체의 상대정량을 이용한 질병 스크리닝 방법

N-당사슬 이성질체의 상대정량을 이용한 질병 스크리닝 방법

출원번호 : 10-2018-0099334 (출원일: 2018-08-24)

등록번호 : 10-2091636 (등록일: 2020-03-16)

특허권자 : 충남대학교산학협력단

요약 : 과제: 종래 당사슬 조성의 차이를 이용하여 질병 유무를 확인하는 방법은 각 질병에 특이적인 당사슬 조성이 많지 않으며, 분석에 시간이 많이 소요되는 문제점이 있다. 과제해결방법: 본 발명은 당사슬 조성이 동일하더라도 정량값에 차이를 보이는 당사슬 이성질체들이 존재함을 밝혀내어 이를 특정 질병의 마커로 이용할 수 있음을 밝혔다. 본 발명은 선택적으로 유리된 체액 내 N-당사슬 중 시알산 (NeuAc)을 함유한 당사슬을 분리·농축한 다음, 트리플 쿼드러플 LC/MS 분석기기와 다중 반응 모니터링 분석방법으로 질량분석하여 얻어진 각 당사슬 이성질체 정량 값의 비율을 확인, 비교하여 특정 질병에 걸렸는지를 확인하는 스크리닝 방법에 관한 것이다.

대표청구항 : 가) 특정 질병 환자군과 정상 대조군으로부터 각각 체액을 얻고, 체액 내 단백질을 변성하여 시료를 준비하는 단계;나) 상기 시료에 효소를 처리하여 시료로부터 N-당사슬을 분리하는 단계;다) 분리한 N-당사슬을 정제 또는 농축하는 단계;라) 정제 또는 농축된 N-당사슬을 트리플 쿼드러플 LC/MS 분석기기와 다중 반응 모니터링 분석방법으로 아래 a) 내지 d) 단계를 거쳐 질량분석하는 단계; a) 농도구배 용리를 이용하여 다공성 흑연화 탄소 충전 컬럼으로 시알산 함유 N-당사슬을 동일한 당 조성 및 동일한 분자량을 갖는 시알산 함유 N-당사슬 별로 각각 분리하는 단계; b) 트리플 쿼드러플 LC/MS 분석기기의 첫 번째 4중극 (quadrupole)에서 상기 a) 단계에서 분리한 각 시알산 함유 N-당사슬에 해당하는 이온 중 하나를 선택하여 통과시키는 단계; c) 첫 번째 4중극을 통과한 시알산 함유 N-당사슬에 해당하는 이온을 두 번째 4중극인 충돌 셀에서 특정 에너지를 가하여 단편화하여 단편 이온 (fragment ion)을 생성하는 단계; 및 d) 상기 충돌 셀에서 생성된 단편 이온 중 표적 물질에 특이적인 단편 이온만 세 번째 4중극을 통과시켜 검출하여 시알산 함유 N-당사슬의 질량분석 크로마토그램을 얻는 단계;마) 상기 라)의 d) 단계에서 얻은 시알산 함유 N-당사슬 질량분석 크로마토그램에서 피크로 나타나는 이성질체 중 환자군과 정상 대조군 간 차이를 보이는 이성질체의 피크 면적 비율을 비교하는 단계; 및바) 비교 결과 환자군과 정상 대조군 간에 피크 면적 비율의 P-값이 10-20 이하로 유의한 차이가 있는 경우 상기 크로마토그램 피크를 상기 특정 질병의 마커로 선정하는 단계;를 포함하며,상기 마) 단계의 시알산 함유 N-당사슬 질량분석 크로마토그램에서 피크로 나타나는 이성질체는 N-당사슬 내에서 시알산의 결합 위치 및 시알산의 글리코시드 연결방식 중 하나 이상에 차이가 있는 것임을 특징으로 하는, 시알산 함유 N-당사슬 이성질체 크로마토그램을 이용한 질병 스크리닝 방법.

상세링크 : http://newsd.wips.co.kr/wipslink/api/dkrdshtm.wips?skey=3520132000852