균일한 크기의 GBS 라이브러리 구축 방법
출원번호 : 10-2017-0081625 (출원일: 2017-06-28)
등록번호 : 10-1919431 (등록일: 2018-11-12)
특허권자 : 충남대학교산학협력단
요약 : 본 발명은 균일한 크기의 GBS 라이브러리 구축 방법에 관한 것으로, 게노믹 DNA 절단을 위한 제한효소의 처리시간, 및 라이브러리 제작을 위한 증폭반응의 조건 등을 조절하여 GBS 분석을 위한 최적의 크기로 GBS 라이브러리를 구축하는 방법에 관한 것으로, 본 발명의 방법을 이용하면 GBS 분석의 효율을 증대시킬 수 있을 것이다.
대표청구항 : (1) 포도로부터 게노믹 DNA를 추출하는 단계;(2) 상기 (1) 단계의 추출한 게노믹 DNA에 ApeKⅠ 제한효소를 처리하고 70~80℃에서 4~6시간 동안 반응시켜 게노믹 DNA를 절단하는 단계;(3) 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 바코드 어댑터 세트와 서열번호 3 및 서열번호 4의 염기서열로 이루어진 공통 어댑터 세트를 각각 듀플렉스(duplex) 형태로 준비하는 단계;(4) 상기 (2) 단계의 절단된 DNA와 상기 (3) 단계에서 준비된 각각의 바코드 및 공통 어댑터 듀플렉스를 혼합하고 라이게이즈(ligase)를 상기 바코드 및 공통 어댑터 듀플렉스 각각 2μM에 대해 300~400U 처리하여 바코드 어댑터-절단된 DNA-공통 어댑터 형태로 결합시키는 단계; 및(5) 상기 (4) 단계의 결합된 바코드 어댑터-절단된 DNA-공통 어댑터를 주형으로 변성(denaturation), 어닐링(annealing), 및 연장(extension)의 사이클을 15~17회 반복하고, 상기 연장 시간은 18~22초로 하여 증폭반응을 수행하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는, 200 내지 400bp 크기의 포도 GBS(genotyping by sequencing) 라이브러리 구축 방법.
상세링크 : http://newsd.wips.co.kr/wipslink/api/dkrdshtm.wips?skey=3518472000742
