인간 혈청 당쇄 지도 및 이를 이용하여 혈청 시료를 검증하는 방법

출원번호 : 10-2013-0036748 (출원일: 2013-04-04)

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특허권자 : 충남대학교산학협력단

요약 : 본 발명은 인간 혈청 N-당쇄 지도, 인간 혈청 N-당쇄 라이브러리 및 이를 이용하여 혈청 시료를 검증하는 방법에 관한 것이다. 정상인과 환자의 혈청시료 200여 개로부터 당쇄를 분리하여 분석한 결과, 정상인과 환자 모두에게서 100% 발견되는 18개의 기본 당쇄를 찾아내었다. 이 기본 당쇄 18종의 존재는 인간 혈청시료가 채취 및 처리과정에서 문제가 없음을 검증하는데 이용될 수 있다. 또한, 본 발명자들은 인간 혈청 단백질의 N-당쇄는 이론적으로는 가능한 당쇄 종류가 매우 많지만, 실제로 N-당쇄는 도 3에 나타낸 것과 같은 구조만이 존재함을 밝혔으며, 존재하는 구조의 N-당쇄들의 출현 백분율을 밝힘으로써 출현 확률이 낮은 N-당쇄들을 특정 질환의 마커로 사용할 수 있음을 밝혔다.

대표청구항 : (a) 준비된 인간 혈청 시료를 효소처리하여 N-당쇄를 분리하는 단계; (b) 분리된 N-당쇄를 분획하는 단계;(c) N-당쇄 분획을 질량분석하는 단계; 및(d) 질량분석 결과, 키토바이오스 코어 (Man3GlcNAc2)에 결합된 당 구조가 각각 (Hex)2 이론적 단일동위원소 질량값 1257, (Hex)3 이론적 단일동위원소 질량값 1419, (Hex)4 이론적 단일동위원소 질량값 1582, (Hex)5 이론적 단일동위원소 질량값 1744, (Hex)6 이론적 단일동위원소 질량값 1906, (HexNAc)2(Fuc)1 이론적 단일동위원소 질량값 1486, (Hex)1(HexNAc)2(Fuc)1 이론적 단일동위원소 질량값 1648, (Hex)2(HexNAc)2(Fuc)1 이론적 단일동위원소 질량값 1810, (Hex)1(HexNAc)3(Fuc)1 이론적 단일동위원소 질량값 1851, (Hex)2(HexNAc)3(Fuc)1 이론적 단일동위원소 질량값 2013, (Hex)2(HexNAc)2(NeuAc)1 이론적 단일동위원소 질량값 1931, (Hex)2(HexNAc)2(NeuAc)2 이론적 단일동위원소 질량값 2244, (Hex)3(HexNAc)3(NeuAc)1 이론적 단일동위원소 질량값 2296, (Hex)3(HexNAc)3(NeuAc)2 이론적 단일동위원소 질량값 2609, (Hex)2(HexNAc)2(Fuc)1(NeuAc)1 이론적 단일동위원소 질량값 2077, (Hex)2(HexNAc)2(Fuc)2(NeuAc)1 이론적 단일동위원소 질량값 2390, (Hex)3(HexNAc)3(Fuc)1(NeuAc)1 이론적 단일동위원소 질량값 2442 및 (Hex)3(HexNAc)3(Fuc)1(NeuAc)2 이론적 단일동위원소 질량값 2755의 18종 구조를 모두 포함하고 있는 경우에만 정상적인 시료로 판단하는 단계;를 포함하는 인간 혈청 시료 검증방법 {단, Man, 만노스 (Mannose); GlcNAc, N-아세틸글루코사민 (N-acetylglucosamine); Hex, 헥소스 (Hexose); HexNAc, N-아세틸헥소사민 (N-acetylhexosamine); Fuc, 퓨코스 (Fucose); NeuAc, N-아세틸뉴라민산 (N-acetylneuraminic acid)}.

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